ตัวกรองเรืองแสงคืออะไร?

 

 

ตัวกรองเรืองแสงเป็นองค์ประกอบสำคัญในกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ระบบทั่วไปมีตัวกรองพื้นฐานสามตัวกรอง: ตัวกรองการกระตุ้น ตัวกรองการปล่อยก๊าซเรือนกระจก และกระจกไดโครอิก โดยทั่วไปจะบรรจุเป็นลูกบาศก์เพื่อรวมกลุ่มเข้าด้วยกันในกล้องจุลทรรศน์

结构

ตัวกรองเรืองแสงทำงานอย่างไร?

ตัวกรองการกระตุ้น

ฟิลเตอร์กระตุ้นจะส่งแสงที่มีความยาวคลื่นเฉพาะและปิดกั้นความยาวคลื่นอื่นๆ สามารถใช้เพื่อสร้างสีที่แตกต่างกันได้โดยการปรับฟิลเตอร์เพื่อให้มีสีเดียวผ่านไปได้ ตัวกรองการกระตุ้นมีสองประเภทหลัก ได้แก่ ตัวกรองผ่านระยะยาวและตัวกรองผ่านแบนด์ ตัวกระตุ้นโดยปกติจะเป็นตัวกรองแบนด์พาสที่ส่งผ่านเฉพาะความยาวคลื่นที่ฟลูออโรฟอร์ดูดซับเท่านั้น ดังนั้น จึงลดการกระตุ้นจากแหล่งฟลูออเรสเซนต์อื่นๆ และปิดกั้นแสงกระตุ้นในแถบการปล่อยฟลูออเรสเซนซ์ ตามที่แสดงโดยเส้นสีน้ำเงินในรูป BP อยู่ที่ 460-495 ซึ่งหมายความว่าสามารถผ่านแสงเรืองแสงที่ 460-495 นาโนเมตรเท่านั้น

โดยวางอยู่ภายในเส้นทางการส่องสว่างของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ และกรองความยาวคลื่นทั้งหมดของแหล่งกำเนิดแสง ยกเว้นช่วงการกระตุ้นฟลูออโรฟอร์ การส่งผ่านตัวกรองขั้นต่ำจะกำหนดความสว่างและความสดใสของภาพ แนะนำให้ส่งผ่านอย่างน้อย 40% สำหรับตัวกรองการกระตุ้นใดๆ เพื่อให้การส่งผ่านเหมาะสมที่สุด >85% แบนด์วิธของตัวกรองการกระตุ้นควรอยู่ภายในช่วงการกระตุ้นฟลูออโรฟอร์ทั้งหมด โดยที่ความยาวคลื่นศูนย์กลาง (CWL) ของตัวกรองจะใกล้เคียงกับความยาวคลื่นการกระตุ้นสูงสุดของฟลูออโรฟอร์มากที่สุด ความหนาแน่นของแสงของฟิลเตอร์กระตุ้น (OD) กำหนดความมืดของภาพพื้นหลัง OD คือการวัดว่าตัวกรองสามารถบล็อกความยาวคลื่นที่อยู่นอกช่วงการส่งข้อมูลหรือแบนด์วิธได้ดีเพียงใด แนะนำให้ใช้ OD ขั้นต่ำ 3.0 แต่ OD 6.0 ขึ้นไปนั้นเหมาะสมที่สุด

แผนภาพสเปกตรัม

ตัวกรองการปล่อยก๊าซเรือนกระจก

ตัวกรองการปล่อยก๊าซมีจุดประสงค์เพื่อให้การเรืองแสงที่ต้องการจากตัวอย่างไปถึงเครื่องตรวจจับ พวกมันปิดกั้นความยาวคลื่นที่สั้นกว่าและมีการส่งผ่านสูงสำหรับความยาวคลื่นที่ยาวกว่า ประเภทตัวกรองยังเชื่อมโยงกับตัวเลข เช่น BA510IF ในรูป (ตัวกรองสิ่งกีดขวางสัญญาณรบกวน) การกำหนดดังกล่าวหมายถึงความยาวคลื่นที่ 50% ของการส่งผ่านสูงสุด

คำแนะนำเดียวกันสำหรับตัวกรองการกระตุ้นถือเป็นจริงสำหรับตัวกรองการปล่อยก๊าซเรือนกระจก: การส่งข้อมูลขั้นต่ำ แบนด์วิธ OD และ CWL ตัวกรองการปล่อยก๊าซที่มี CWL ที่เหมาะสม การส่งสัญญาณขั้นต่ำ และการผสมผสาน OD จะให้ภาพที่สว่างที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ โดยมีการบังที่ลึกที่สุด และรับประกันการตรวจจับสัญญาณการปล่อยที่เบาที่สุด

กระจกไดโครอิก

กระจกไดโครอิกวางอยู่ระหว่างตัวกรองการกระตุ้นและตัวกรองการปล่อยก๊าซที่มุม 45° และสะท้อนสัญญาณกระตุ้นไปยังฟลูออโรฟอร์ ขณะส่งสัญญาณการปล่อยก๊าซไปยังเครื่องตรวจจับ ตัวกรองไดโครอิกและตัวแยกลำแสงในอุดมคติมีการเปลี่ยนผ่านที่คมชัดระหว่างการสะท้อนสูงสุดและการส่งสัญญาณสูงสุด โดยมีการสะท้อน >95% สำหรับแบนด์วิธของตัวกรองการกระตุ้นและการส่งผ่าน >90% สำหรับแบนด์วิดท์ของตัวกรองการปล่อยสัญญาณ เลือกฟิลเตอร์โดยคำนึงถึงความยาวคลื่นที่ตัดกัน (แล) ของฟลูออโรฟอร์ เพื่อลดแสงเล็ดลอดและเพิ่มอัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนของภาพฟลูออเรสเซนต์ให้สูงสุด

กระจกไดโครอิกในรูปนี้คือ DM505 ซึ่งได้รับการตั้งชื่อเช่นนี้เนื่องจาก 505 นาโนเมตรคือความยาวคลื่นที่ 50% ของการส่งผ่านสูงสุดสำหรับกระจกนี้ เส้นโค้งการส่งผ่านของกระจกนี้แสดงการส่งผ่านข้อมูลที่สูงเหนือ 505 นาโนเมตร การลดลงอย่างมากของการส่งผ่านทางด้านซ้ายที่ 505 นาโนเมตร และการสะท้อนแสงสูงสุดทางด้านซ้ายของ 505 นาโนเมตร แต่ยังคงมีการส่งผ่านบางส่วนที่ต่ำกว่า 505 นาโนเมตร

อะไรคือความแตกต่างระหว่างฟิลเตอร์ Long Pass และ Band Pass?

ฟิลเตอร์เรืองแสงสามารถแบ่งออกได้เป็น 2 ประเภท: ฟิลเตอร์กรองแสงแบบยาว (LP) และฟิลเตอร์กรองแสงแบบแบนด์พาส (BP)

ฟิลเตอร์กรองสัญญาณแบบยาวจะส่งผ่านความยาวคลื่นยาวและปิดกั้นคลื่นที่สั้นกว่า ความยาวคลื่นคัตออนคือค่าที่ 50% ของการส่งผ่านสูงสุด และความยาวคลื่นทั้งหมดที่อยู่เหนือคัตออนจะถูกส่งผ่านฟิลเตอร์กรองความถี่ยาว มักใช้ในกระจกไดโครอิกและตัวกรองการปล่อยก๊าซ ควรใช้ตัวกรอง Longpass เมื่อการใช้งานต้องการการรวบรวมการปล่อยก๊าซสูงสุด และเมื่อการเลือกปฏิบัติทางสเปกตรัมไม่เป็นที่ต้องการหรือจำเป็น ซึ่งโดยทั่วไปคือกรณีของโพรบที่สร้างสายพันธุ์ที่เปล่งแสงเดี่ยวในชิ้นงานทดสอบที่มีระดับออโตฟลูออเรสเซนต์พื้นหลังค่อนข้างต่ำ

ตัวกรองแบนด์พาสจะส่งเฉพาะแถบความยาวคลื่นบางช่วงเท่านั้น และบล็อกแถบอื่นๆ ลดสัญญาณรบกวนโดยปล่อยให้เฉพาะส่วนที่แข็งแกร่งที่สุดของสเปกตรัมการปล่อยฟลูออโรฟอร์สามารถส่งได้ ลดสัญญาณรบกวนจากแสงออโตฟลูออเรสเซนต์ และปรับปรุงอัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนในตัวอย่างแสงออโตฟลูออเรสเซนต์พื้นหลังสูง ซึ่งฟิลเตอร์ส่งผ่านความถี่สูงไม่สามารถนำเสนอได้

BestScope สามารถจัดหาชุดกรองเรืองแสงได้กี่ประเภท?

ฟิลเตอร์ทั่วไปบางประเภทได้แก่ ฟิลเตอร์สีน้ำเงิน เขียว และอัลตราไวโอเลต ดังแสดงในตาราง

ชุดกรอง

ตัวกรองการกระตุ้น

กระจกไดโครอิก

ตัวกรองสิ่งกีดขวาง

หลอดไฟ LED ความยาวคลื่น

แอปพลิเคชัน

B

บีพี460-495

DM505

บีเอ510

485 นาโนเมตร

·FITC: วิธีแอนติบอดีเรืองแสง

·ส้มที่เป็นกรด: DNA, RNA

·ออรามีน: บาซิลลัสตุ่ม

·EGFP, S657, RSGFP

G

BP510-550

DM570

บีเอ575

535 นาโนเมตร

·โรดามีน TRITC: วิธีแอนติบอดีเรืองแสง

·โพรพิเดียมไอโอไดด์: DNA

·การเสนอราคา

U

บีพี330-385

DM410

บีเอ420

365 นาโนเมตร

·การสังเกตการเรืองแสงอัตโนมัติ

·DAPI: การย้อมสีดีเอ็นเอ

·Hoechest 332528, 33342: ใช้สำหรับการย้อมสีโครโมโซม

V

บีพี400-410

DM455

บีเอ460

405 นาโนเมตร

·แคทีโคลามีน

·5-ไฮดรอกซีทริปทามีน

·เตตราไซคลิน: โครงกระดูก, ฟัน

R

บีพี620-650

DM660

บีเอ670-750

640 นาโนเมตร

·Cy5

·อเล็กซา ฟลูออร์ 633, อเล็กซา ฟลูออร์ 647

ชุดตัวกรองที่ใช้ในการตรวจฟลูออเรสเซนซ์ได้รับการออกแบบตามความยาวคลื่นหลักที่ใช้ในการใช้งานฟลูออเรสเซนซ์ ซึ่งอิงตามฟลูออโรฟอร์ที่ใช้มากที่สุด ด้วยเหตุนี้ จึงตั้งชื่อตามฟลูออโรฟอร์ที่มีไว้สำหรับการถ่ายภาพ เช่น ก้อนตัวกรอง DAPI (สีน้ำเงิน), FITC (สีเขียว) หรือ TRITC (สีแดง)

ชุดกรอง

ตัวกรองการกระตุ้น

กระจกไดโครอิก

ตัวกรองสิ่งกีดขวาง

หลอดไฟ LED ความยาวคลื่น

สธ

บีพี460-495

DM505

บีเอ510-550

485 นาโนเมตร

ดาปี

บีพี360-390

DM415

บีเอ435-485

365 นาโนเมตร

ทริทซ์

บีพี528-553

DM565

บีเอ578-633

535 นาโนเมตร

FL-ออรามีน

บีพี470

DM480

บีเอ485

450 นาโนเมตร

เท็กซัสเรด

BP540-580

DM595

บีเอ600-660

560 นาโนเมตร

เอ็มเชอร์รี่

บีพี542-582

DM593

บีเอ605-675

560 นาโนเมตร

รูปภาพ

คุณจะเลือกตัวกรองเรืองแสงได้อย่างไร?

1. หลักการเลือกตัวกรองฟลูออเรสเซนซ์คือปล่อยให้แสงฟลูออเรสเซนซ์/แสงที่ปล่อยออกมาผ่านส่วนปลายของภาพให้มากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ และปิดกั้นแสงกระตุ้นในเวลาเดียวกัน เพื่อให้ได้อัตราส่วนสัญญาณต่อเสียงรบกวนสูงสุด โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการใช้การกระตุ้นหลายโฟตอนและกล้องจุลทรรศน์การสะท้อนภายในทั้งหมด สัญญาณรบกวนที่อ่อนแอจะทำให้เกิดการรบกวนอย่างมากต่อเอฟเฟกต์การถ่ายภาพ ดังนั้นข้อกำหนดสำหรับอัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนจึงสูงกว่า

2. รู้สเปกตรัมการกระตุ้นและการปล่อยก๊าซของฟลูออโรฟอร์ ในการสร้างชุดฟิลเตอร์เรืองแสงที่สร้างภาพคุณภาพสูงและคอนทราสต์สูงพร้อมพื้นหลังสีดำ ฟิลเตอร์กระตุ้นและการปล่อยก๊าซควรได้รับการส่งผ่านข้อมูลสูงโดยมีการกระเพื่อมของพาสแบนด์น้อยที่สุดในบริเวณที่สอดคล้องกับจุดสูงสุดหรือการปล่อยก๊าซของฟลูออโรฟอร์

3. พิจารณาความทนทานของฟิลเตอร์เรืองแสง ฟิลเตอร์เหล่านี้จะต้องไม่ทนต่อแหล่งกำเนิดแสงที่มีความเข้มข้นสูงซึ่งสร้างแสงอัลตราไวโอเลต (UV) ซึ่งอาจนำไปสู่ ​​"ความเหนื่อยหน่าย" ได้ โดยเฉพาะฟิลเตอร์กระตุ้นเนื่องจากต้องได้รับความเข้มเต็มที่ของแหล่งกำเนิดแสง

ภาพตัวอย่างฟลูออเรสเซนต์ต่างๆ

ภาพเรืองแสงของ BS-2083F+BUC5F-830CC
ภาพเรืองแสงของ BS-2081F+BUC5IB-830C

ทรัพยากรจะถูกรวบรวมและจัดระเบียบบนอินเทอร์เน็ต และใช้เพื่อการเรียนรู้และการสื่อสารเท่านั้น หากมีการละเมิดใด ๆ โปรดติดต่อเราเพื่อลบ


เวลาโพสต์: Dec-09-2022